簡(jiǎn)要描述：武漢尚恩生物生產(chǎn)的支原體PCR檢測試劑盒采用巢式PCR法(Nested PCR)以提高支原體檢測的靈敏度和和特異性?；驹硎?，先在支原體rRNA上的16S和23S上設計一對引物，用于擴增部分16S-23S之間的保守區以及全部的其間間隔區，保守區可以用于判斷是否存在支原體污染。支原體PCR檢測試劑盒（巢式PCR）
產(chǎn)品型號：SNCD-001廠(chǎng)商性質(zhì)：生產(chǎn)廠(chǎng)家更新時(shí)間：2023-06-28訪(fǎng) 問(wèn) 量：958相關(guān)文章Related articles
| 品牌 | 其他品牌 | 貨號 | SNCD-001 |
|---|---|---|---|
| 規格 | 盒裝 | 供貨周期 | 現貨 |
| 主要用途 | 實(shí)驗 | 應用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
武漢尚恩生物生產(chǎn)的支原體PCR檢測試劑盒（巢式PCR）采用巢式PCR法(Nested PCR)以提高支
原體檢測的靈敏度和和特異性?；驹硎?，先在支原體rRNA上的16S和23S上設
計一對引物，用于擴增部分16S-23S之間的保守區以及全部的其間間隔區，保守區
可以用于判斷是否存在支原體污染。
| 產(chǎn)品名稱(chēng) | 支原體PCR檢測試劑盒（巢式PCR） |
| 貨號 | SNCD-001 |
| 規格 | 250次（20ul體系） |
| 簡(jiǎn)介 | 支原體（Mycoplasma）別名霉形體，直徑0.1-0.3um，具有高度多樣性，是一種沒(méi)有細胞壁、可以用人工培養基培養增殖的最小的原核生物。其廣泛存在于人和動(dòng)物體內，大多數不致病。由于其廣泛存在，外加體積較小可以通過(guò)濾膜混入細胞培養體系，也很難通過(guò)普通光鏡觀(guān)察到，普通抗生素對其也沒(méi)有有效的抑制作用，因此成為細胞培養中比較常見(jiàn)而且難以檢測清除的污染。 支原體污染對細胞會(huì )有多方面的影響，包括以下方面：1.細胞生長(cháng)速度改變；2.細胞形態(tài)、狀態(tài)改變；3.細胞染色體異常、突變甚至功能改變；4.細胞對環(huán)境沖擊耐受力降低；5.相關(guān)細胞實(shí)驗獲得的數據異常等?？梢哉f(shuō)對細胞及細胞相關(guān)實(shí)驗有極其嚴重的影響，因此檢測及清除廣泛存在的支原體污染成為諸多實(shí)驗室必須要經(jīng)歷的過(guò)程。 支原體污染無(wú)法通過(guò)肉眼或者普通光鏡直接判斷，只能通過(guò)各種試劑、儀器檢測。支原體常規檢測方法有：熒光法、培養法、電鏡法、常規PCR法、一步PCR法、化學(xué)發(fā)光法等，不同檢測方法能夠檢測的支原體種類(lèi)不同，其檢測靈敏度、特異性、便捷性也有各自的特點(diǎn)。 本公司生產(chǎn)的支原體PCR檢測試劑盒采用巢式PCR法(Nested PCR)以提高支原體檢測的靈敏度和和特異性?；驹硎?，先在支原體rRNA上的16S和23S上設計一對引物，用于擴增部分16S-23S之間的保守區以及全部的其間間隔區，保守區可以用于判斷是否存在支原體污染，因此初次PCR產(chǎn)物即可初步判定是否存在支原體污染；其次，在23S和間隔區設計第二對引物，保證第二對引物目標序列在第一對引物目標序列之內，形成巢式結構，然后使用第二對引物對初次PCR的產(chǎn)物進(jìn)行二次擴增，可以大大提高檢測的特異性和靈敏度。原理圖如下：  |
| 使用方法 | 1.客戶(hù)需要自備的試劑、儀器 <1>待檢測樣品：細胞上清、血清或者培養基、細胞DNA。 細胞上清建議使用培養細胞3-5天的上清，培養時(shí)間過(guò)短的上清支原體含量較低可能無(wú)法有效檢出，血清或者培養基也應在培養箱靜置培養1-2天使支原體有一定程度增殖再用于檢測；細胞懸液無(wú)法直接用于檢測，需要提取總DNA后檢測，添加量為PCR體系的1/20或更少。 <2>儀器、試劑 a.PCR相關(guān)：PCR儀、無(wú)菌PCR管、微量離心機 b.電泳相關(guān)：瓊脂糖凝膠、電泳儀、電泳緩沖液、DNA marker、DNA染色液 c.通用：移液器、無(wú)菌Tip頭、離心管等 2.實(shí)驗步驟 <1>1st PCR a.按以下表格加入各反應試劑  b.1st PCR反應參數： STEP1 (起始變性): 94oC 30sec STEP2 (變性): 94oC 30sec STEP3 (退火): 55oC 2min STEP4 (延伸): 72oC 1min STEP5 (循環(huán)): Go To STEP2 for 30 cycles STEP6 (最終延伸): 72oC 5min STEP7 (臨時(shí)保存): 4oC forever <2>2nd PCR a.按以下表格加入各反應試劑  b.2nd PCR反應參數： STEP1 (起始變性): 94oC 30sec STEP2 (變性): 94oC 30sec STEP3 (退火): 55oC 2min STEP4 (延伸): 72oC 1min STEP5 (循環(huán)): Go To STEP2 for 30 cycles STEP6 (最終延伸): 72oC 5min STEP7 (臨時(shí)保存): 4oC forever 3.結果檢測 <1>取2次PCR產(chǎn)物各10uL，通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳并染色觀(guān)察目的條帶。由于不同類(lèi)型的支原體擴增出來(lái)的條帶大小不一，因此通過(guò)條帶大小可以粗略判斷支原體類(lèi)型，如需要進(jìn)一步檢測確定，建議對產(chǎn)物進(jìn)行測序比對。 <2>結果示例  2nd產(chǎn)物 1st 產(chǎn)物 Marker |
| 產(chǎn)品組分 |  |
| 存儲條件 | -20℃（避免反復凍融） |
| 保質(zhì)期 | -20℃一年（避免反復凍融） |
注意事項：
1.該產(chǎn)品-20度可以保存一年以上，但反復凍融或保存不當可能會(huì )導致引物或陽(yáng)性對照失效，如需多次使用，建議小量分裝。
2.該試劑盒確認可以檢測Mycoplasma arginini 、Mycoplasma arthritidis 等12種支原體，但無(wú)法檢測人肺炎支原體。
3.該產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于診斷或臨床實(shí)驗。
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