293細胞*培養基

293細胞是腺病毒載體的包裝細胞。腺病毒是繼逆轉錄病毒后用于基因治療研究的熱門(mén)載體。直接將腺病毒載體導入人體內表達目的基因，治療惡性腫瘤、心血管疾病或一些遺傳疾病已取得可喜進(jìn)展；利用腺病毒載體在包裝細胞293中表達分泌性蛋白質(zhì)，如蛋白酪氨*激酶1C等亦成為生產(chǎn)重組蛋白的一條途徑。因此完善293細胞的大規模培養技術(shù)具有越來(lái)越重要的市場(chǎng)意義。哺乳細胞的大規模培養方式有三種：貼壁培養、微載體培養、無(wú)血清懸浮培養。這三種方式均可用于293細胞的大規模培養。

轉瓶培養一般用于小量培養到大規模培養的過(guò)渡階段，或作為生物反應器接種細胞準備的一條途徑。與傳統靜止單層培養相比，轉瓶具有三大優(yōu)點(diǎn)：為細胞提供較大的生長(cháng)表面；輕微的轉動(dòng)可以防止培養液中形成的某些成分對細胞生長(cháng)可能產(chǎn)生的影響：細胞大部分時(shí)間僅覆蓋一薄層培養液，有利于氣體交換。我們已成功實(shí)現293細胞的轉瓶培養。由于293細胞對生長(cháng)環(huán)境的改變較為敏感，細胞容易成團，因此維持穩定的溫度、酸堿度和轉動(dòng)速度對細胞正常均勻生長(cháng)至關(guān)重要。

胚腎細胞系293是一種E1區缺陷互.補細胞系。用磷酸鈣共轉染法很容易使DNA進(jìn)入細胞。懸浮的293細胞很容易大規模培養，但不容易長(cháng)期保持穩定，應用時(shí)最好采用單層培養。

傳達次數較少的單層培養293細胞是成功獲得重組病毒和病毒斑的關(guān)鍵。293細胞的培養質(zhì)量特別是單層培養的品質(zhì)情況是病毒斑形成的重要因素。也是重組子構建成功與否的關(guān)鍵。293細胞在傳代120次以后，其生長(cháng)狀況不再*是單層的了，偶爾會(huì )形成局部的細胞成團聚集，一旦出現這種情況很能形成病毒斑。應立即拋棄，重新引入新傳代的細胞。單層培養細胞在5一10%FBSDMEM中能生長(cháng)很好。一般來(lái)講，1：10傳代后，一周可以長(cháng)滿(mǎn)。嚴禁過(guò)度生長(cháng)，這點(diǎn)很重要。因為會(huì )導致細胞密度加大和堆積，影響病毒斑的形成和轉染。