--細 胞 基 本 信 息---

細胞名稱(chēng)： HL-60(人原髓細胞白血病細胞)

細胞別稱(chēng)： HL 60; HL60

細胞貨號： SNL-040

生長(cháng)特性： 懸浮

培養條件： 1640+10% FBS+1% P/S

培養環(huán)境： 空氣，95%； 二氧化碳 (CO2)，5%；37℃

細胞簡(jiǎn)介： HL-60細胞是源自一位患有急性粒-單核細胞白血病的36歲白人女性的早幼粒細胞系。HL-60細胞自發(fā)分化，丁酸鹽、次黃嘌呤、佛波醇、肉豆蔻酸、DMSO(1%-1.5%)、放線(xiàn)菌素D和視黃酸均可以促進(jìn)分化。HL-60細胞表現出吞噬活性，并對趨化刺激有響應；HL-60細胞致癌基因myc表達陽(yáng)性。該細胞系可用于免疫紊亂和免疫學(xué)研究。

細胞正常生長(cháng)形態(tài)照片

HL-60細胞培養注意事項

l HL-60細胞懸浮圓形生長(cháng)，偶有小聚團，屬于正?，F象，無(wú)需吹散；

l 少量細胞附著(zhù)瓶底屬于正?，F象，可將懸浮細胞轉移至新瓶，丟棄貼壁的細胞；

l 圓形透亮、細胞膜完整的細胞是活細胞，如果無(wú)法判斷，可以取少量細胞用臺盼藍染色后計數確定細胞活率；

l 接種密度建議在10萬(wàn)-50萬(wàn)細胞/mL之間為宜，密度過(guò)低或過(guò)高都可能造成細胞狀態(tài)變差；

l 復蘇時(shí)需盡快離心去除DMSO，避免DMSO刺激HL-60細胞發(fā)生分化；

l HL-60細胞生長(cháng)需要穩定的環(huán)境，不頻繁拿出培養箱，不頻繁離心；

l 當細胞狀態(tài)較差時(shí)，不建議對細胞進(jìn)行離心，需換液時(shí)可采用半換液法（詳細步驟見(jiàn)下文）

HL-60細胞換液方法

l 半換液法：

1. 準備所需的培養基、離心管以及無(wú)菌槍頭等；（培養基提前預熱）

2. 將培養瓶豎立靜置一段時(shí)間，待細胞沉底；（肉眼觀(guān)察細胞沉底情況）

3. 小心吸出一半的培養基，轉移到離心管；

4. 900-1000rpm 3min離心，離心管里若有細胞，則用新鮮培養基重懸后放回原瓶；

5. 原瓶補充一半的新鮮培養基，混勻細胞，放入培養箱中繼續培養。

l 離心換液法：

1. 準備所需的培養基、離心管以及無(wú)菌槍頭等；（培養基提前預熱）

2. 將所有細胞懸液轉移至離心管中；

3. 900-1000rpm，3min離心；

4. 培養瓶中加入適量新鮮培養基；（T25推薦10mL，T75推薦20mL）

5. 離心完成后棄上清，加適量新鮮培養基輕輕重懸細胞沉淀，將細胞懸液接種回培養瓶中，混勻細胞，放入培養箱中繼續培養。

HL-60細胞傳代方法

l 離心法：

1.取少量細胞懸液進(jìn)行計數確定細胞密度，密度80萬(wàn)/mL以上傳代，并根據計數結果確定傳代比例；

2.準備所需的培養基、離心管以及無(wú)菌槍頭等；（培養基提前預熱）

3.用移液器吸取培養瓶?jì)燃毎麘乙?/span>轉移至離心管中；

4.900-1000rpm，3min離心收集細胞；

5.在培養瓶中加入適量新鮮培養基；（T25推薦10mL，T75推薦20mL）

6.離心完成后，棄離心管內上清，然后加入適量新鮮培養基，輕輕重懸吹散細胞，將細胞懸液均勻接種至培養瓶中，輕輕混勻后將細胞放入培養箱中繼續培養。

Tips：懸浮細胞通常都偏脆弱，注意控制吹打力度盡可能輕柔和離心轉速以及時(shí)間不要過(guò)高，避免細胞受機械損傷。

l 直接分瓶法：

1. 取少量細胞懸液進(jìn)行計數確定細胞密度，密度80萬(wàn)/mL以上傳代，并根據計數結果確定傳代比例；

2. 輕輕搖晃培養瓶，使細胞均勻分散；

3. 用移液器吸取培養瓶?jì)燃毎麘乙?，均分到若干個(gè)新培養瓶中，每瓶再補充適量的新鮮培養基，輕輕混勻后將細胞放入培養箱中繼續培養。

Tips：用直接分瓶法傳代1-2次后需進(jìn)行離心傳代。

HL-60細胞凍存方法

1. 取少量細胞懸液進(jìn)行計數確認細胞密度。

Tips：若凍存前培養基已經(jīng)變黃，先換液靜置培養4h左右，待細胞活力穩定后再進(jìn)行凍存。

2. 準備所需的培養基、PBS、血清、DMSO、離心管以及無(wú)菌槍頭等；（試劑需提前預熱）

3. 根據收集到細胞量，配制相應量的凍存液，并準備相應數量的凍存管，在凍存管上標志細胞名稱(chēng)，代次，凍存時(shí)間等信息。推薦凍存液配方：92%FBS+8%DMSO或92%完*培養基+8%DMSO；凍存密度200-300萬(wàn)細胞/mL/管。

Tips：凍存密度過(guò)低將導致復蘇后狀態(tài)不佳。

4. 將細胞懸液轉移至離心管中1000rpm，3min離心收集細胞；

5. 離心完成后棄上清，加入相應量的配置好的凍存液輕輕重懸混勻細胞，將細胞懸液分裝至凍存管中。注意吹打力度，不要產(chǎn)生過(guò)多氣泡；

Tips：加入凍存液混勻細胞后及時(shí)分裝并將細胞降溫凍存，以減少DMSO對細胞的毒性。

6. 將細胞放置程序降溫凍存盒中，再將凍存盒轉移至-80℃冰箱進(jìn)行降溫凍存。

7. 次日復蘇一管檢查凍存效果，確認沒(méi)問(wèn)題后及時(shí)將凍存細胞放置液氮中保存，細胞在-80℃冰箱放置時(shí)間不要超過(guò)3天。

HL-60細胞復蘇方法

1. 提前將水浴鍋預熱至37℃，培養基復溫至室溫或37℃，離心機設置好轉速；

2. 將凍存細胞從液氮或-80℃冰箱中取出，迅速置于37℃水浴，快速搖晃至完*融化，融化時(shí)間1min左右；

3. 直接將凍存管900-1000rpm 2min離心，同時(shí)在培養瓶中加入適量新鮮培養基；

4. 離心完成后棄上清，吸取1mL新鮮培養基輕輕重懸細胞，吹散細胞后接種到培養瓶中；

5. 使用十字法或8字法將細胞混勻后置于培養箱中培養。

Tips：

1. 若液氮或冰箱距離細胞房較遠，細胞需要放在干冰或冰盒上運送至細胞房。

2. 細胞融化后需盡快離心去除DMSO，避免DMSO刺激HL-60細胞發(fā)生分化。

3. 整個(gè)細胞復蘇過(guò)程在盡可能5-10min內完成。

HL-60細胞收貨攻略

1. 拆封包裝盒，確認細胞，說(shuō)明書(shū)等是否齊全，收貨細胞名與所購買(mǎi)細胞是否符合；

2. 觀(guān)察細胞培養瓶是否完好，有無(wú)漏液，培養瓶?jì)扰囵B基是否有肉眼可見(jiàn)的絮狀物或者渾濁等，發(fā)現異常及時(shí)拍照聯(lián)系銷(xiāo)售人員；

3. 確認無(wú)異常后，將培養瓶表面消毒，然后撕掉封口膜豎立放入培養箱平衡4h左右，讓?xiě)腋〖毎料屡囵B瓶底部；

4. 平衡過(guò)程中可以仔細閱讀細胞說(shuō)明書(shū)，知悉細胞所需培養體系，培養環(huán)境以及培養注意事項等；

5. 平衡完成后豎立取出細胞培養瓶，此時(shí)大部分細胞沉在培養瓶底部，小心吸取上清至離心管中，保留10mL左右培養基在培養瓶?jì)?，小心操作，盡量不要吸到沉在底部的細胞；

6. 將離心管1200rpm，5min離心收集未沉下培養瓶底部的細胞，上清可以4℃保存，后續用于培養細胞，以平穩過(guò)度到自己的培養基。將收集到的細胞接種至原培養瓶；

7. 輕輕混勻細胞，取100-200ul細胞懸液進(jìn)行計數，根據計數結果調整細胞培養密度。然后置于培養箱中培養。

常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案

1.細胞密度怎么計算的？

嚴格意義上，細胞密度需要收集細胞懸液計數細胞數量，但在實(shí)際培養過(guò)程中，并不需要為了精確控制細胞數量而計數。因此，常用的細胞密度指細胞相對于最大生長(cháng)密度的比值，貼壁細胞可以粗略的用細胞所占培養容器底面積百分比表示，即顯微鏡下觀(guān)察培養容器底部，有細胞的區域占總區域的百分比值，當然這種表達方式受限于單個(gè)細胞生長(cháng)不同密度時(shí)所占面積不同導致并不嚴謹，但也是相當直觀(guān)、簡(jiǎn)便的表現細胞狀態(tài)的一種方式。

NO.2培養過(guò)程中細胞碎片較多怎么處理？

1. 細胞內的黑色顆粒是細胞外分泌泡及細胞器折光，這個(gè)屬于細胞自身特性，無(wú)法清除也無(wú)法改變，大部分細胞都會(huì )有這種現象，只是不同細胞顆粒多少有區別，細胞培養體系不適應、營(yíng)養缺乏、滲透壓異常等均可能導致細胞內顆粒增加，建議使用合適的培養條件。

2. 細胞外的黑色顆粒大部分是細胞碎片和細胞代謝產(chǎn)物，可通過(guò)900-1000rpm，3min離心以去除部分碎片。少量碎片不影響細胞生長(cháng)，不建議頻繁離心。

產(chǎn)品推薦：

【SNL-040】 HL-60(人原髓細胞白血病細胞)(STR鑒定正確)

【SNLM-040】HL-60細胞專(zhuān)用完*培養基