原代細胞復蘇操作

　　一、準備材料
 

　　(1)儀器：凈化工作臺、離心機、恒溫水浴箱、倒置相差顯微鏡、培養箱、液氮冰箱
 

　　(2)玻璃器皿：吸管(彎頭、直頭)、培養瓶、玻璃瓶(250ml、100ml)、廢液缸
 

　　(3)塑料器皿：吸頭、槍頭、膠塞、移液管(10ml)、15ml離心管、凍存管(1～2ml)
 

　　(4)其他物品：微量加樣槍、紅血球計數板、記號筆、醫用橡皮膏、移液槍
 

　　(5)試劑：PBS、小牛血清、培養液、雙抗(青霉素、鏈霉素)、胰蛋白酶(0.08%)
 

　　二、操作步驟

 

　　(1)原代細胞從液氮容器中取出凍存管，直接浸入37℃溫水中，并不時(shí)搖動(dòng)令其盡快融化。
 

　　(2)從37℃水浴中取出凍存管，75%酒精**后，打開(kāi)蓋子，用吸管吸出細胞懸液，加到離心管中。PriCells推薦接種培養瓶，37℃培養箱靜置培養。
 

　　(3)離心，1000rpm，5min。PriCells推薦不離心。
 

　　(4)棄去上清液，加入含10%小牛血清培養液重懸細胞，計數，調整細胞密度，接種培養瓶，37℃培養箱靜置培養。PriCells推薦小牛血清濃度依據原代細胞種類(lèi)。
 

　　(5)次日更換一次1/2培養液，繼續培養。
 

　　三、注意事項
 

　　(1)將凍存管從液氮容器中取出時(shí)，要做好防護工作，以免**。
 

　　(2)取出凍存管后立即放入水浴中，使其盡快融化(在1-2分鐘內)。
 

　　(3)復蘇*好用新配制的培養液。