就一個(gè)實(shí)驗室而言無(wú)論運作的多么好,總會(huì )因為革新技術(shù)或拓展方向二影響原來(lái)的流程,從而產(chǎn)生各種各樣的問(wèn)題。有些地方錯誤的操作有可能帶來(lái)嚴重的后果,那么今天主要列舉細胞生長(cháng)緩慢的兩大原因。
01
培養體系出現問(wèn)題
01
檢查你所培養的細胞是否存在污染。
(1)如果培養細胞未添加抗生素,細胞污染則是不可避免的。
① 用肉眼和顯微鏡進(jìn)行檢查。
② 如果細胞被污染則要棄掉。
(2)由于支原體污染不容易覺(jué)察到,因此必須定期檢測。
(3)檢測可能污染的途徑和原因。
02
檢查你用于培養細胞的培養基和血清(例如:是否批次不同或廠(chǎng)商不同)。如果你常規使用的是粉劑或10×儲存液,而現在購買(mǎi)的培養基更換為1×液體,而隨后證明問(wèn)題就出自于此。
03
如果問(wèn)題與培養基無(wú)關(guān),那么很可能還是細胞的問(wèn)題。
(1)復蘇另一支凍存的細胞,并且與正在培養的細胞加以比較。兩種細胞的培養應分開(kāi),以免在培養之初就產(chǎn)生污染。隨后按(2)~(4)步的方法做排查。
(2)對傳代培養的細胞進(jìn)行計數,并繪制生長(cháng)曲線(xiàn),與以前培養該細胞的資料進(jìn)行比較,檢查是否有下列改變:
① 傳代時(shí)是否接種密度過(guò)低。
② 細胞傳代是否過(guò)于頻繁。
③ 傳代前細胞平臺期是否過(guò)長(cháng)。
(3)是否更換了胰蛋白酶或其他分離劑的批號,檢查批號和供貨商。
(4)是否細胞分離過(guò)程中嚴重損傷了細胞,應檢測:
① 胰蛋白酶(其他消化試劑)消化時(shí)間是否過(guò)長(cháng)。
② 消化液的濃度和活性是否過(guò)高、過(guò)強。
③ 胰蛋白酶消化時(shí),孵箱溫度是否過(guò)高。
④ 吹打消化細胞時(shí)是否過(guò)于用力。
⑤ 細胞是否對 EDTA過(guò)于敏感(如果添加了EDTA)。
⑥ 胰蛋白酶稀釋是否有誤。
⑦ 是否使用了一批劣質(zhì)的胰蛋白酶消化液。
02
檢查共用的設備和試劑
溫度設定不準
01
a 自動(dòng)調溫器損壞。
b 開(kāi)關(guān)孵箱門(mén)過(guò)于頻繁。
c 孵箱門(mén)未關(guān)緊。
d 風(fēng)扇損壞造成散熱不均。
孵箱濕度不能維持
02
a 水盤(pán)中未加水。
b 孵箱有滲漏。
c 開(kāi)關(guān)孵箱門(mén)過(guò)于頻繁。
d 在Petri培養皿中放置一定量的PBS,每日稱(chēng)重,以檢查蒸發(fā)率。
孵箱的CO2濃度不準
03
a 開(kāi)關(guān)孵箱門(mén)過(guò)于頻繁。
b CO2控制器出現問(wèn)題。
公 司 簡(jiǎn) 介
武漢尚恩生物技術(shù)有限公司坐落于武漢東湖區光谷生物城,專(zhuān)注于細胞及系列產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和服務(wù),公司建有標準化GMP實(shí)驗室、動(dòng)物房,已整體通過(guò)ISO 9001:2015質(zhì)量管理體系認證,獲得企業(yè)、3551人才、瞪羚企業(yè)、科技小巨人等多項榮譽(yù)?! ?/span>
公司主要研發(fā)生產(chǎn)細胞系、原代細胞、胎牛血清、基礎培養基、*培養基、輔助試劑等系列產(chǎn)品,提供細胞及培養配套產(chǎn)品一站式采購;細胞庫凍存細胞系500余種,同時(shí)通過(guò)不間斷引種細胞擴大豐富細胞種類(lèi);公司還提供人源細胞系的STR鑒定、大小鼠的種屬鑒定服務(wù)等?! ?/span>
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