【小尚教細胞】傳代細胞的常規培養

傳代時(shí)間一般通過(guò)兩個(gè)方面進(jìn)行確定：一是在細胞培養過(guò)程中，當培養液由于 ph值下降而呈現黃色時(shí)，表明細胞已經(jīng)達到最大密度，需要換液或進(jìn)行傳代培養；二是觀(guān)察細胞形態(tài)，健康細胞形態(tài)飽滿(mǎn)，折光性好，生長(cháng)致密時(shí)即可傳代。初代培養的初次傳代很重要，是建立細胞系的關(guān)鍵時(shí)期。在初次傳代時(shí)一般要特別注意以下3點(diǎn)：

①細胞沒(méi)有生長(cháng)到足以覆蓋瓶底壁的大部分表面之前，不要急于傳代。

②原代培養時(shí)細胞多為混雜生長(cháng)，上皮樣細胞和成纖維樣細胞并存的情況很常見(jiàn)。傳代時(shí)不同的細胞有不同的消化時(shí)間，因此要根據需要，注意觀(guān)察及時(shí)進(jìn)行處理，并可根據不同細胞對胰蛋白酶的耐受時(shí)間不同而分離和純化所需要的細胞。另外早期傳代的培養細胞較已經(jīng)建系的培養消化時(shí)間相對較長(cháng)。吹打細胞時(shí)動(dòng)作要輕巧，盡可能減少對細胞的損傷。

③初次傳代時(shí)細胞接種數量要多一些，使細胞能盡快適應新環(huán)境有利于細胞生存和增殖。隨消化分離而脫落的組織塊也可一并傳入新的培養瓶。

體外培養技術(shù)中所謂的傳“代"概念并不等于細胞生物學(xué)中“親代細胞"與“子代細胞"中“代"的概念。傳代培養的實(shí)質(zhì)就是分離后再次培養，進(jìn)行一次分離再培養稱(chēng)之為傳一代，傳代數可以衡量培養物的培養年齡。

傳代是細胞分裂造成的結果，細胞從一次分裂結束到下一次分裂結束為一個(gè)細胞周期，分為間期與分裂期兩個(gè)階段。細胞周期能準確表示細胞增殖速度。兩次細胞分裂之間的時(shí)間也可以用細胞世代時(shí)間來(lái)表示，所以細胞周期指細胞一個(gè)世代所經(jīng)歷的時(shí)間。正常細胞培養的世代數有限，只有癌細胞和發(fā)生轉化的細胞才能無(wú)限生長(cháng)下去。

傳代代數與細胞的世代數（增殖代數）并不是同一個(gè)概念。在細胞培養時(shí)，所說(shuō)的“第6代細胞"指細胞已經(jīng)傳代6次。以貼壁細胞為例，每傳代一次，大概要倍增3~6次，細胞要經(jīng)歷如下生長(cháng)過(guò)程：游離期、貼壁期、潛伏期、對數生長(cháng)期和停止期（平臺期）。當細胞達到平臺期時(shí)，就要進(jìn)行傳代培養，否則細胞會(huì )中毒，發(fā)生形態(tài)改變，甚至死亡。

培養細胞有密度依賴(lài)和接觸抑制的特點(diǎn)，細胞濃度過(guò)低，不易存活，表現為細胞在達到增長(cháng)前有較長(cháng)的滯留期；細胞濃度過(guò)高，發(fā)生接觸抑制后生長(cháng)遲緩甚至死亡，所以傳代比例通常按1:2~1:4的稀釋度進(jìn)行。傳代后細胞的接種濃度一般為5x105個(gè)/mL。

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