a549細胞是一種廣泛使用的人肺腺癌細胞系

　　a549細胞是一種廣泛使用的人肺腺癌細胞系，來(lái)源于原發(fā)性肺腫瘤。具有高度增殖性，現已被用于各種研究應用。在自然界中，這些細胞是鱗狀的，它們可以通過(guò)肺泡擴散傳播一些物質(zhì)，如水和電解質(zhì)。如果將A549細胞體外培養，它們會(huì )成長(cháng)為單層細胞，附著(zhù)或緊貼在培養瓶上。人肺泡上皮細胞株A549可以固定或懸掛在體外的溶液。這些細胞的另一個(gè)特點(diǎn)是他們能夠合成卵磷脂，并且含有高度不飽和的脂肪酸，這對于維持細胞膜磷脂有重要意義。
 

　　a549細胞傳代：
 

　　(1)無(wú)菌操作打開(kāi)培養瓶瓶蓋，倒掉培養液。
 

　　(2)向已經(jīng)長(cháng)滿(mǎn)得細胞中加入消化液1m1，輕輕搖動(dòng)培養瓶，使消化液流遍所有得細胞表面，吸棄或倒掉，輕輕沖洗細胞表面2~3遍，以盡可能去除原培養液中得牛血清。
 

　　(3)加入1ml消化液，在37℃培養箱中孵育5~8min后把培養瓶放置在倒置顯微鏡下觀(guān)察，發(fā)現細胞得胞質(zhì)回縮、胞間質(zhì)增大后，立即終止消化、
 

　　(4)加入5ml預熱至37℃得培養液，用玻璃吸管反復吹打以分散細胞、吹打過(guò)程按順序進(jìn)行，從培養瓶底部一邊開(kāi)始到另一邊結束，以確保所有得底部都被吹到、
 

　　(5)吸取一半得細胞懸液，接種到新得25cm2培養瓶中，補足培養液，并且添加10%~20%得胎牛血清。通常每瓶液體量為5～10ml。
 

　　(6)倒置顯微鏡下觀(guān)察，37℃、5%C0。培養。
 

　　a549細胞的維持和培養：
 

　　(1)準備一個(gè)盛有37℃溫水的燒杯，從液氮罐中取出存有A549細胞的凍存管，放于37℃溫水中，用鑷子夾住輕輕搖動(dòng)使其迅速融化。
 

　　(2)1000~2000r，3~5min離心。
 

　　(3)在無(wú)菌操作臺中采用75%的乙醇*擦拭凍存管，然后打開(kāi)凍存管，注意動(dòng)作要輕柔。
 

　　(4)用1ml槍頭將上清液去除，加入1ml預熱的細胞培養液將細胞吹散開(kāi)，轉移至25cm2培養瓶中。
 

　　(5)補充4ml的RPMI1640培養基，并且添加10%的胎牛血清。
 

　　(6)倒置顯微鏡下觀(guān)察，37℃、5%C02培養。
 

　　(7)24h后，更換新的培養液。
 

　　(8)常規傳代培養。