小鼠原代細胞的相關(guān)知識普及

　　小鼠原代細胞培養是指直接從動(dòng)物體內獲取的細胞、組織和器官，經(jīng)體外培養后，直到傳代為止。這種培養，首先用無(wú)菌操作的方法，從動(dòng)物體內取出所需的組織（或器官），經(jīng)消化，分解成單個(gè)游離細胞，在人工培養下，使其不斷的生長(cháng)及繁殖。

 

　　細胞培養是一種操作繁瑣而又要求十分嚴謹的實(shí)驗技術(shù)。是用無(wú)菌的方法將動(dòng)物體內的組織（或器官）取出，模擬動(dòng)物體內的生理條件，在體內進(jìn)行培養，使其不斷生長(cháng)、繁殖，人們借以觀(guān)察細胞生長(cháng)、繁殖、細胞分化以及細胞衰老等過(guò)程的生命現象。要使細胞能在體外長(cháng)期生長(cháng)，必須滿(mǎn)足兩個(gè)基本要求：一是供給細胞存活所必須的條件，如適量的水、無(wú)機鹽、氨基酸、維生素、葡萄糖及其有關(guān)的生長(cháng)因子、氧氣、適宜的溫度，注意外環(huán)境酸堿度與滲透壓的調節。二是嚴格控制無(wú)菌條件。

 

　　細胞培養的意義：具有其他生物技術(shù)不可對比的優(yōu)點(diǎn)培養條件易改變和控制便于單因子分析便于人們直接對細胞內結構、細胞生長(cháng)及發(fā)育等過(guò)程的觀(guān)察在生物學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域如分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)及病毒學(xué)等已被廣泛應用。細胞培養的局限性在脫離機體復雜環(huán)境下細胞培養條件與軀體環(huán)境有一定距離觀(guān)察到的結果有時(shí)難以正確反映機體內的狀況細胞培養得到的產(chǎn)物少。

 

　　小鼠原代細胞實(shí)驗步驟:

　　1、小鼠麻醉

　　根據體重計算相應的麻醉劑量并腹腔注射（也可以用異氟烷進(jìn)行空氣麻醉）

　　2、對*麻醉后的小鼠進(jìn)行解剖，打開(kāi)腹腔，找到小鼠下腔靜脈及門(mén)靜脈，使用滯留針插入下腔靜脈，將50-60ml的緩沖溶液一在10-20min內緩慢注射進(jìn)入小鼠血液循環(huán)內，看到小鼠肝臟有明顯腫脹時(shí)剪開(kāi)門(mén)靜脈，完成后改用緩沖溶液二進(jìn)行沖洗。

　　3、沖洗完成后，將小鼠肝臟剪下，轉移至DMEM高糖培養基，用DMEM培養基清洗2-3次后，使用滅菌鑷子將肝臟在培養基內撕開(kāi)，使原代肝細胞從肝臟內流出。

　　4、將分離得到的肝臟細胞過(guò)篩網(wǎng)篩選，過(guò)濾組織碎塊及其他雜質(zhì)，并對細胞混懸液離心，按照一定的離心力得到初步的肝細胞沉淀，此時(shí)的肝細胞中混雜著(zhù)肝臟實(shí)質(zhì)細胞和非實(shí)質(zhì)細胞，需要使用percoll離心液進(jìn)行梯度離心。

　　5、梯度離心后的細胞即為原代肝臟實(shí)質(zhì)細胞，重懸后計數即可用于后續的實(shí)驗，若對細胞純度存疑，也可以進(jìn)行流式測定。