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細胞異常形態(tài)大盤(pán)點(diǎn)

更新時(shí)間:2024-06-18瀏覽:231次

在這個(gè)看臉的世界里,連細胞都不例外。細胞養得好看,也說(shuō)明了細胞狀態(tài)很好。細胞培養是一段漫長(cháng)的旅程,而在旅途中隨著(zhù)時(shí)間推移,細胞的外觀(guān)可能會(huì )發(fā)生一些變化,比如變大、變小、聚團、空泡等等。這些變化可能是正?,F象,也可能是狀態(tài)不好的細胞在向我們發(fā)出求救信號。

那么細胞形態(tài)發(fā)生異常變化,是什么原因導致的,該如何處理呢?小尚這就帶大家一探究竟~

 

1. 細胞聚團

 

有一些單層貼壁生長(cháng)的細胞,在遇到低溫環(huán)境、劇烈震蕩、血清不合適的時(shí)候容易發(fā)生聚團,如GL261、C4-2、SH-SY5Y等。一般來(lái)說(shuō),重新消化接種就能恢復正常單層貼壁。使用多聚賴(lài)氨酸或明膠包被培養器皿,也可以有效促進(jìn)細胞單層貼壁,預防聚團發(fā)生。圖片1右.png

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1. 左:GL261細胞發(fā)生聚團 右:GL261正常單層貼壁

 

消化時(shí)間不足導致細胞沒(méi)有消化開(kāi),細胞也可能抱團貼壁。繼續培養至24小時(shí),待細胞狀態(tài)穩定后,重新進(jìn)行消化接種就行啦。下次消化可以適當延長(cháng)消化時(shí)間,記得接種后在顯微鏡下看一看細胞是不是已經(jīng)分散成單細胞了,確保萬(wàn)wu一失。

 

細胞在長(cháng)滿(mǎn)后不傳代,長(cháng)時(shí)間維持高密度培養,也可能會(huì )形成非常致密的細胞團,這種細胞團不容易清除,傳代之后還會(huì )出現。所以咱們在培養細胞的時(shí)候要密切關(guān)注細胞密度,除非實(shí)驗要求細胞鋪滿(mǎn),一般到80%左右匯合度就要傳代了,可不能偷懶哦。

 

注意!有些細胞天生就是聚團生長(cháng)(NK-92、Jurkat等),可別當作異常狀態(tài)誤傷了友軍。

 

 

2. 細胞皺縮

 

貼壁弱的細胞(如293系列細胞系)不能牢牢地“扒住"培養瓶,遇到震蕩會(huì )縮起來(lái);它們也非常怕冷,碰到低溫環(huán)境“縮成一團"。此時(shí)只需放回培養箱靜置一段時(shí)間細胞就可以恢復正常。當然,如果靜置過(guò)夜了細胞還是皺縮狀態(tài),就需要重新消化一下啦。

 

 

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2. 左:受到震蕩的SH-SY5Y細胞 右:靜置后恢復正常貼壁形態(tài)

 

 

所以在培養貼壁較弱的細胞時(shí),要悉心呵護,輕拿輕放。不在室溫下放置太長(cháng)時(shí)間,換液或傳代前,一定要37℃預熱培養基和PBS預防細胞脫落。 

 

多聚賴(lài)氨酸或明膠包被培養器皿可以增強吸附性,在培養貼壁較弱的細胞時(shí)可以酌情使用。

 

 

3. 細胞空泡

細胞出現空泡,通常是細胞受到壓力的體現。損傷,藥物刺激,培養基成分不對,培養溫度、氣相等不合適都可能導致空泡。去掉壓力來(lái)源,可減少空泡產(chǎn)生。平時(shí)培養時(shí)建議添加足量的培養基,及時(shí)換液、傳代,可別讓細胞餓著(zhù)啦!在進(jìn)行吹打等操作時(shí)動(dòng)作盡量輕柔,避免損傷。

 

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3. 左:培養基成分不適宜導致細胞產(chǎn)生空泡 右:優(yōu)化培養基成分后空泡減少

 

 

有的細胞含有的空泡是正常的膜泡活動(dòng),可查看ATCC、DSMZ、ECACC等國際細胞庫提供的細胞照片確認細胞空泡是否屬于正常情況。

 

 

4. 細胞變細拉絲

細胞大量變細、拉絲,同時(shí)伴隨著(zhù)生長(cháng)變慢(甚至停止生長(cháng))、漂浮細胞多、細胞間連接減少等不正常的現象,說(shuō)明細胞受到了損傷,可以嘗試增加血清比例(最高不超過(guò)20%)調整細胞狀態(tài)。要好好回憶一下,究竟是哪一步操作損傷了細胞,避免下次培養出現同樣的問(wèn)題。

 

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4 左:正常Hepa1-6細胞 右:受損的Hepa1-6細胞

 

同樣,細胞拉絲并不一定是細胞狀態(tài)差,看到視野中有幾個(gè)細胞拉絲不要緊張,細胞分裂時(shí)會(huì )伸出細絲輔助貼壁,而有的細胞類(lèi)型自帶細絲(如神經(jīng)元),要結合細胞特性、生長(cháng)速度等多方面來(lái)看哦。

 

6. 細胞衰老

 

原代培養的細胞經(jīng)過(guò)有限次數分裂后將發(fā)生復制衰老(replicative senescence),衰老細胞有兩個(gè)標志性生物學(xué)特性:1. 細胞停止生長(cháng)2. 衰老相關(guān)半乳糖苷酶(SA β-Gal)活化,用其底物進(jìn)行染色即可識別衰老細胞(圖5)。通常,衰老細胞在形態(tài)上變大,變得扁平,細胞間連接減少。

仍然需要注意有的細胞在低密度時(shí)也會(huì )呈現此形態(tài),因而不能單從形態(tài)判斷,還需結合上述生物學(xué)特性綜合判斷細胞是否衰老。

 

圖片5右.png

 

5. SA β-Gal染色(左:正常細胞 右:衰老細胞)[1]

 

所以,下次當你看到形態(tài)異常的細胞時(shí),不妨想想它們本身應該具有怎樣的特性,它們經(jīng)歷了怎樣的危機才發(fā)生這種變化。對癥下藥,細胞就能越養越漂亮!

 

 

參考文獻

 

1. Beck J, Horikawa I, Harris C. Cellular Senescence: Mechanisms, Morphology, and Mouse Models. Veterinary Pathology. 2020;57(6):747-757. doi:10.1177/0300985820943841

 


 

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