細胞世界:細胞培養時(shí)候里面的圓球球到底是什么？

細胞培養千千萬(wàn)，隔天一看全完蛋。我待細胞如初戀，奈何細胞黑了臉。試問(wèn)何處方有解，細胞世界看小尚?？蒲姓朗菧嫔?，山高水遠伴君旁。

Hello，各位小伙伴們大家好，我是尚恩生物技術(shù)支持小尚，歡迎大家來(lái)到尚恩生物科普類(lèi)技術(shù)講解欄目-細胞世界，本欄目致力于深入淺出的對細胞培養過(guò)程種所遇到的一些現象進(jìn)行講解，歡迎持續關(guān)注。好了，今天就先水到這，話(huà)不多說(shuō)，咱們直接開(kāi)始。

相信很多小伙伴們在進(jìn)行貼壁細胞培養時(shí)經(jīng)常會(huì )看到一些比較大的圓形透亮的東西，謹慎且好奇的小伙伴不禁心里泛起嘀咕：

這到底是什么？以前怎么沒(méi)有見(jiàn)過(guò)？會(huì )不會(huì )是污染了奇奇怪怪的東西？

(什么？你說(shuō)你沒(méi)有見(jiàn)過(guò)？那有沒(méi)有一種可能，你看細胞過(guò)于專(zhuān)注于貼壁的細胞了，根本沒(méi)有注意到圓圓的？)

案 例 分 享

小伙伴A:IEC-6細胞，細胞從一開(kāi)始就有小圓圈圈,形態(tài)不一致,是不是真菌污染了

小伙伴B：A2780這種亮晶晶的細胞，是雜細胞嗎 我之前買(mǎi)過(guò)類(lèi)似的細胞，里面有雜細胞，我怕又買(mǎi)了雜細胞。

這時(shí)候就輪到有8年多細胞培養經(jīng)驗、6年技術(shù)支持經(jīng)驗的小尚出馬了。

我們先指出來(lái)這兩個(gè)客戶(hù)反應的問(wèn)題在哪，免得有些過(guò)于專(zhuān)注貼壁細胞的小伙伴還沒(méi)看出來(lái)這兩個(gè)小伙伴講的是個(gè)啥。

喏，看到紅色箭頭指的位置了嘛，就是這個(gè)圓圓的，為了方便，我們在這里就把它叫做球球。

（這里不得不吐槽下，有些小伙伴的拍照技術(shù)真的堪憂(yōu)，你笑別的小伙伴拍的看不清，殊不知更有小伙伴拍的連細胞都看不到。一想到這，小尚不禁淚流，看了六年的照片，六年！你知道這六年我怎么過(guò)的嘛？你們這拍照技術(shù)，給對象拍照那不得分分鐘被爆錘？）

好了，回歸正題。

真菌排除

首先，球球這個(gè)東西肯定不是小伙伴A說(shuō)的真菌，因為大部分常見(jiàn)的真菌在培養基里都是以營(yíng)養體的形式存在，其中大部分又是呈樹(shù)枝狀分叉或者規則形態(tài)的菌絲，就像下面這樣。

這樣看明顯都不是圓形的，基本可以排除這部分真菌。當然還有一部分單細胞真菌是圓形的，比如酵母菌，它就長(cháng)這樣。

那有反應快的小伙伴就激動(dòng)了：對對對，就是它就是它，球球就是酵母菌，罪魁禍首！

?小尚跟你說(shuō)：小伙子反應快是好事，但你還是太年輕，把握不住，給你五毛，撤回讓我來(lái)。其實(shí)實(shí)際上球球也并不是酵母菌，原因很簡(jiǎn)單，常見(jiàn)酵母菌大小比哺乳動(dòng)物細胞還是小很多的，就像下圖這樣，其中培養的細胞大家都看得出來(lái)，而那真菌黑色箭頭指的才是酵母菌，是不是比細胞小多了？這樣看就對比很明顯了，大小差異幾乎直接可以排除酵母菌的可能。

那又有較真的小伙伴說(shuō)了：那真菌也有大的啊，不可能是一些大的真菌嘛。

?小尚跟你說(shuō)：這又涉及到另一方面了，真菌作為比較簡(jiǎn)單的生物，其增殖速度通常是比哺乳動(dòng)物的細胞快很多的。如果真菌都到能在顯微鏡下輕易看到的程度，那這個(gè)細胞再在培養箱甚至室溫放1-2天，就會(huì )明顯渾濁到肉眼可見(jiàn)的程度，也基本上宣告細胞涼涼了，根本沒(méi)有辦法繼續培養。

所以，通過(guò)形態(tài)、大小差異和生長(cháng)速度判斷，球球不是真菌。

雜細胞排除

接下來(lái)，我們看看是不是小伙伴B說(shuō)的雜細胞呢？

這種情況通常就不是簡(jiǎn)單的看形態(tài)下可以分辨出來(lái)的了，必須要進(jìn)行實(shí)驗進(jìn)行驗證。

?第一種實(shí)驗很簡(jiǎn)單，我們姑且取名培養法，就是利用貼壁程度差異收集圓形和貼壁細胞分別培養，看最終培養出來(lái)的細胞是否一樣。如果確實(shí)長(cháng)出來(lái)的細胞是一樣的，基本可以確認不是雜細胞；如果長(cháng)出來(lái)確實(shí)不一樣，就得利用到下面的方法了。

?第二種方法是進(jìn)行標志物檢測，我們都知道不同類(lèi)型的細胞標志物不一樣，比如內皮細胞標志物是CD31、成纖維細胞標志物是Vimentin等，這類(lèi)標志物可以一定程度上反應細胞是否存在雜細胞。當然實(shí)際上來(lái)說(shuō)，原代細胞提取必然存在部分雜細胞，檢測陽(yáng)性率肯定不會(huì )是100%。細胞系和細胞株理論上來(lái)說(shuō)是純細胞，那應該陽(yáng)性率是100%了？這還真不一定，例如CA46細胞（DSMZ ACC-73）標志物CD19表達率99%、CD20表達率92%，確實(shí)是會(huì )有一些細胞不表達標志物，但這也不能說(shuō)明細胞不純。細胞在不同增殖周期、不同培養條件下標志物表達情況都會(huì )有差異，這個(gè)是很正常的現象。就像即使是雙胞胎，總會(huì )有這里那里的區別，正如世界上沒(méi)有相同的兩片樹(shù)葉這句話(huà)一樣。所以，標志物檢測也只能作為參考，并不能斷定。

?第三種方法就是進(jìn)行細胞鑒定了，這就是最客觀(guān)公正的驗證方式了，這里又可以分兩個(gè)情況。

第一個(gè)情況就是不同種屬細胞交叉污染，另一種是同種屬交叉污染。

⊙1.前者只要做個(gè)種屬鑒定就可以了，種屬特異性引物、試劑盒、檢測服務(wù)在很多公司都有，相對來(lái)說(shuō)比較簡(jiǎn)單。

⊙2.第二個(gè)情況是必須對細胞進(jìn)行STR鑒定了，STR鑒定可以有效的分辨同種屬之間的細胞交叉污染（不了解STR過(guò)程的小伙伴可以查下相關(guān)資料，需要講解的話(huà)可以私信吱一聲，如果需要了解的小伙伴多的話(huà)，我們可以在后續專(zhuān)門(mén)講解）。STR是目前可靠的細胞鑒定方法，但這種方法也有局限性，那就是這個(gè)必須有相應的特異性引物才能對該種屬進(jìn)行鑒定，同時(shí)也必須要有公開(kāi)的位點(diǎn)信息才能做細胞系匹配。目前人源STR比較成熟，相關(guān)位點(diǎn)和引物都滿(mǎn)足科研甚至是診斷需要，基本可以判斷細胞是否存在交叉污染甚至是確認污染的是那個(gè)細胞系（順帶提一句，小尚家的人源細胞提供STR報告，可以排除細胞存在交叉污染的情況哦）；小鼠源的STR近些年也有發(fā)展，但總體來(lái)說(shuō)目前只有80來(lái)種細胞系有位點(diǎn)可以匹配，其他沒(méi)有公開(kāi)的位點(diǎn)，由于位點(diǎn)缺乏可對比性，所以相對來(lái)說(shuō)檢測結果大部分不能用于細胞匹配，用來(lái)判斷細胞是否存在交叉污染是沒(méi)有問(wèn)題的，但基本無(wú)法判斷是什么細胞交叉污染；至于大鼠、猴、雞、狗、豬等其他種屬，那就更慘了，目前一個(gè)公開(kāi)的位點(diǎn)都沒(méi)有，做出來(lái)STR只能判斷細胞是否交叉，根本沒(méi)法判斷交叉的種類(lèi)。

其實(shí)呢，雖然國內細胞相關(guān)產(chǎn)業(yè)相比國外起步晚，但近幾十年確實(shí)得到了飛速發(fā)展，細胞保種都相對比較規范了，極少出現細胞相互交叉污染的情況。小尚自己也做過(guò)很多細胞的鑒定，基本不存在細胞交叉污染的現象。有很多細胞其實(shí)本身就是有多種形態(tài)存在的，鑒定結果顯示他們確實(shí)都是一樣的細胞。當然，各位小伙伴在培養的時(shí)候還是得規范操作，避免細胞間交叉污染，因為一旦交叉污染就不能用了，只能重新培養。

答 案 揭 曉

看了這么久，相信很多小伙伴都撓頭了，如果說(shuō)球球不是真菌也不是雜細胞，那到底是什么？

我們先看一段視頻，注意仔細盯著(zhù)球球看，可以多看幾遍盯著(zhù)不同位置的球球看。

（來(lái)源日本JCRB細胞庫資料）

發(fā)現了嘛，這個(gè)球球大部分都會(huì )一分為二并在之后化身貼壁細胞消失不見(jiàn)。

所以答案揭曉，球球其實(shí)也是正常的細胞，由于空間不足或者其他原因導致沒(méi)有貼壁而呈圓形生長(cháng)，同時(shí)又由于細胞是一直在增殖的，所以這個(gè)球球貼壁了，那個(gè)球球又冒出來(lái)了，看起來(lái)就像是一直都存在一樣，其實(shí)人家已經(jīng)一批又換一批了。

這個(gè)其實(shí)是細胞增殖過(guò)程中很常見(jiàn)的現象，相信之前就有不少小伙伴查過(guò)很多細胞庫的很多細胞形態(tài)照片，或許只是未注意到這種情況。這個(gè)還是非常常見(jiàn)的現象，不代表細胞存在污染或者不純哦。

好的，今天的細胞世界帶大家了解了球球具體是什么，相信大家已經(jīng)非常清楚的了解到了，之后實(shí)驗也可以更加胸有成竹了。

小尚掐指一算，肯定有很多小伙伴也想看看自己養的細胞到底是怎么增殖的。上面細胞增殖視頻用到的是細胞增殖延時(shí)攝影技術(shù)，其實(shí)原理就是在一段時(shí)間內通過(guò)顯微鏡以特定的速率（通常為幀/秒（fps））捕捉標本的圖像，最終合成一段細胞增殖的視頻。當然大部分小伙伴應該是用不上這個(gè)的，不過(guò)為了滿(mǎn)足大家好奇心，小尚特意準備了日本JCRB細胞庫視頻查詢(xún)，其中有600多種細胞增殖的延時(shí)攝影視頻，有興趣的小伙伴們可以去搜搜看有沒(méi)有自己培養的細胞的增殖視頻。

JCRB細胞庫視頻查詢(xún)：

最后，祝各位小伙伴培養的細胞越來(lái)越好，實(shí)驗順順利利，科研路途一路坦蕩。

推薦產(chǎn)品:

IEC-6細胞

A2780細胞