細胞攻略 | SK-LU-1(人低分化肺腺癌細胞)細胞培養教程

細 胞 基 本 信 息

▲SK-LU-1細胞正常生長(cháng)形態(tài)照片

--細 胞 基 本 信 息---

細胞名稱(chēng):  SK-LU-1(人低分化肺腺癌細胞)

細胞別稱(chēng):   SK-Lu-1; SK LU 1; SK-Lu1; SK-LU1; SKLU-1; SKLU1; SKLU01

細胞貨號:   SNL-229

生長(cháng)特性:   貼壁

培養條件:   DMEM+10% FBS+1% P/S

培養環(huán)境:  空氣，95%；二氧化碳 (CO2)，5%

細胞簡(jiǎn)介:  SK-LU-1細胞來(lái)源于一名64歲患有肺腺癌（III級）的白人女性。SK-LU-1細胞在免疫耐受大鼠中是致瘤的。SK-LU-1細胞支原體污染于1971年被發(fā)現并消除，可以用于3D細胞培養。

細 胞 凍 存 攻 略

凍存步驟:

1、先將細胞按傳代步驟消化、離心，至傳代步驟4，棄細胞上清，獲得細胞沉淀；

2、加入適量預先配好的程序性?xún)龃嬉狠p輕重懸細胞，并將細胞懸液轉移至做好標記的凍存管中；

3、將凍存管放入程序性?xún)龃婧?，放?/span>-80℃冰箱過(guò)夜；

4、轉移細胞至液氮保存并登記細胞保存位置，液氮保存24h后建議復蘇一管檢測凍存細胞的活性，若活性合格即可長(cháng)期保存，若低于80%建議重新凍存；

Tips：

◎1. 檢測凍存細胞活性結果未合格前，培養瓶?jì)燃毎ㄗh繼續培養直至確認凍存合格方可視需要丟棄；

◎2. 程序性?xún)龃嬉盒枰浜铣绦蛐詢(xún)龃婧惺褂?，若使用非程序凍存液可以按產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)處理降溫過(guò)程；

◎3. T25培養瓶長(cháng)滿(mǎn)通?？梢?xún)龃?-3管，10cm皿長(cháng)滿(mǎn)可以?xún)龃?-4管；

細 胞 復 蘇 攻 略

復蘇步驟:

1、將所需的培養基放在培養箱預熱30min后開(kāi)始復蘇；

2、準備37度溫水，將細胞從液氮罐取中出，觀(guān)察管內無(wú)液氮的情況下，捏住管蓋，將細胞凍存部分浸入溫水輕輕搖晃，融化至米粒大小冰塊，終止水??；

3、將凍存管以離心力150g(約900rpm)左右離心1-2min，不同離心機具體轉速會(huì )有差異；

4、離心完成后，棄凍存液，用剛才預熱的培養基緩慢加入凍存管，并輕柔重懸細胞后接種至T25或者10cm皿中。

Tips：

◎1. 凍存管在液氮長(cháng)期保存過(guò)程中難免滲入液氮，取出細胞時(shí)震動(dòng)不要過(guò)大，水浴前一定要觀(guān)察管內是否存在液氮，若有液氮建議靜置一會(huì )待液氮蒸發(fā)后再水??；

◎2. 水浴時(shí)可以使用一次性PE手套包住凍存管避免直接接觸水源，以降低管蓋縫隙滲入水導致污染的概率；

◎3. 水浴至剩米粒大小時(shí)及時(shí)終止水浴，避免過(guò)度水浴或水浴時(shí)間不足；

◎4. 建議水浴完成后直接在離心管內離心細胞，避免再次轉移細胞；

◎5. 復蘇后的細胞比較脆弱，吹打和轉移細胞時(shí)盡量輕柔，復蘇24h后換液去除死亡細胞；

#常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案

一、細胞密度怎么計算的？

嚴格意義上，細胞密度需要收集細胞懸液計數細胞數量，但在實(shí)際培養過(guò)程中，并不需要為了精確控制細胞數量而消化細胞計數。因此，常用的細胞密度指細胞相對于最大生長(cháng)密度的比值，貼壁細胞可以粗略的用細胞所占培養容器底面積百分比表示，即顯微鏡下觀(guān)察培養容器底部，有細胞的區域占總區域的百分比值，當然這種表達方式受限于單個(gè)細胞生長(cháng)不同密度時(shí)所占面積不同導致并不嚴謹，但也是相對直觀(guān)、簡(jiǎn)便的表現細胞狀態(tài)的一種方式；

二、培養過(guò)程中細胞碎片較多怎么處理？

1. 細胞內的黑色顆粒是細胞外分泌泡及細胞器折光，這個(gè)屬于細胞自身特性，無(wú)法清除也無(wú)法改變，大部分細胞都會(huì )有這種現象，只是不同細胞顆粒多少有區別，細胞培養體系不適應、營(yíng)養缺乏、滲透壓異常等均可能導致細胞內顆粒增加，建議使用合適的培養條件。

2. 細胞外的黑色顆粒大部分是細胞碎片和細胞代謝產(chǎn)物，可以先吸走培養基后用PBS潤洗清除，再加新的培養基繼續培養。潤洗不能清除的可以換液清洗后等細胞密度70-80%左右消化處理細胞，消化完成后加培養基終止消化，混勻細胞，收集細胞懸液900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清。再加5ml PBS重懸細胞，再離心后，用培養基重懸接種到新的培養皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時(shí)碎片比較少，傳代時(shí)可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次。

三、細胞具體消化時(shí)間是多久？

每個(gè)客戶(hù)用的胰酶活力及消化步驟、試劑都是不一樣的，不能規定消化時(shí)間，以實(shí)際消化效果和客戶(hù)經(jīng)驗為準。

文 獻 引 用

Title:        

USP5-Beclin 1 axis overrides p53-dependent senescence and drives Kras-induced tumorigenicity

Journal:   Nature Communications

Date:      2022/12/23

Product name：  SK-LU-1(人低分化肺腺癌細胞)

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