hela細胞進(jìn)行傳代培養的操作步驟

　　hela細胞通過(guò)關(guān)閉某些信號通路(包括PI3K和MKK4/MAPK信號通路),激活某些信號通路(包括cAMP、Ca~(2+)—CaM、PKC、Ras和P38/MAPK信號通路),激活或抑制不同的信號分子,使細胞產(chǎn)生具有針對性的細胞效應,包括誘導表達多種特異性蛋白(酶、細胞骨架蛋白、細胞因子等)、改變代謝途徑、減弱某些代謝、加強另一些代謝以及提高胞內運輸能力等,使自己可以適應痢疾桿菌的侵襲而生存下去。
 

　　hela細胞傳代培養的操作步驟：
 

　　1.觀(guān)察培養基是否正常，細胞狀態(tài)如何，細胞密度如何，決定是否傳代。觀(guān)察時(shí)擰緊蓋子。
 

　　2.加熱PBS、versene、培養基，(提前做好)瓶子不要倒著(zhù)放，不要讓液體接觸到瓶塞。
 

　　3.打開(kāi)超凈臺(先開(kāi)風(fēng)機，后開(kāi)照明)，用75%乙醇清潔臺面，點(diǎn)燃酒精燈。不要把廢液缸拿出去倒，如果廢液太多，可以用其他容器先裝廢液。取小離心管一個(gè)，置于架子上。
 

　　4.取尖吸管、吸量管各一支，放置在專(zhuān)用的架上。放置的方式，注意吸管、吸量管前端都不要與架子接觸。
 

　　5.取待傳代的細胞。打開(kāi)versene，用酒精燈外焰燒。燒吸管時(shí)距離酒精燈心遠些，不要把渣滓帶進(jìn)去。把試劑拿入臺子的時(shí)候，盡量平穩，不要讓試劑碰到瓶口。
 

　　6.用吸量管吸取舊的培養基，置離心管中，吸量管加入versene，然后將versene瓶收起來(lái)。(加versene主要是為了將舊培養基洗去)。在離心管中間部分將液體加入。吸液體和加液體時(shí)都不要對著(zhù)細胞。
 

　　7.打開(kāi)胰酶，然后將versene棄掉。換新管，用尖吸管吸取適量胰酶加入。加胰酶后，盡快放平，使細胞消化時(shí)間一致。
 

　　8.將細胞放入37度孵箱。放孵箱2min,收胰酶，打開(kāi)PBS.之后拿出來(lái)鏡下隨時(shí)觀(guān)察。使用二次消化法，去除容器中殘余的細胞。別忘了用舊培養基中和。