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6步教你動(dòng)物細胞如何培養?

更新時(shí)間:2022-09-16瀏覽:1855次

細胞培養技術(shù)已經(jīng)成為當今生命科學(xué)各領(lǐng)域的基礎技術(shù)和基本技能,它也是細胞工程、基因工程和生物醫學(xué)工程的重要研究手段。那我們在實(shí)際的動(dòng)物細胞培養實(shí)驗中需要注意哪些基本要求呢?


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實(shí)驗前準備
實(shí)驗前必須分門(mén)別類(lèi)地制訂操作卡片,如清洗卡、消毒卡、細胞常用液(細胞培養液、BSS液、消化液)配制卡、牛血清檢測分裝卡、細胞原代和傳代操作卡等。各卡片上注明實(shí)驗所需器材的名稱(chēng)、規格、數量、操作要領(lǐng)和實(shí)驗注意事項等。實(shí)驗前應按卡片收集、清點(diǎn)所需用品,一并放入超凈臺內,這樣可避免操作時(shí)因物品不全而往返拿取所浩成的污染。同時(shí),根據每個(gè)實(shí)驗的要求,準備好瓶管支架器械消毒盒等。實(shí)驗器材準數要大于實(shí)驗使用數,瓶蓋數要大于瓶數。這樣才能有條不紊地做實(shí)驗,也減少了忙亂操作所引起的污染。
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無(wú)菌室和操作室消毒
無(wú)菌室內每周用乳酸蒸氣(或過(guò)氧乙酸)加紫外線(xiàn)消毒1~2次。實(shí)驗前,將實(shí)驗器材放入超凈臺內,打開(kāi)超凈臺紫外線(xiàn)燈,同時(shí)啟動(dòng)超凈臺風(fēng)機,40 min后消毒完畢,關(guān)閉紫外線(xiàn)燈。這樣,超凈臺內空氣被凈化,超凈臺面構成相對無(wú)菌的環(huán)境。
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無(wú)菌操作要求

①手指不能觸及器材使用端。如觸及,器材需更換或燒灼后再使用(如瓶口)。

②減少手與器材的接觸面,學(xué)會(huì )手指操作。

③一切操作,如打開(kāi)或封閉瓶口,安裝吸管、注射器等,都要在火焰前方進(jìn)行。瓶口、吸管、注射器使用前要經(jīng)過(guò)火焰消毒后使用。

④瓶口順風(fēng)斜放在支架上。試劑用后立即封閉瓶口。瓶口長(cháng)時(shí)間敞開(kāi)會(huì )增加落菌的機會(huì )。

⑤不同的細胞同時(shí)操作時(shí),要專(zhuān)管專(zhuān)用,并要勤換吸管,防止擴大污染和交叉污染。

⑥瓶口液滴不能倒回瓶?jì)?。液滴用干酒精棉球擦拭,瓶口再?jīng)火焰消毒。

⑦操作者動(dòng)作要準確敏捷,盡量避免空氣流動(dòng)。

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實(shí)驗中操作要求

洗手、著(zhù)裝與外科臨床要求相同。雙手用肥皂洗凈后浸泡于消毒液中,并用75%的酒精擦拭。細胞培養用液從冰箱取出,試劑瓶口和外壁經(jīng)灑精外布擦洗后人超凈臺,超凈臺面要用酒精紗布擦拭。超凈臺上的物品面布局合理,污染廢液缸、酒精棉球缸在右側位,酒精燈在中央位,試劑瓶在左側位。拆除大包裝,點(diǎn)燃灑精燈(95%灑精)、火焰無(wú)色或微黃色表示酒精雜質(zhì)少,酒精燃燒*(不能使用廢酒精或工業(yè)酒精,這類(lèi)酒精燃燒時(shí)產(chǎn)生的化學(xué)物質(zhì)易附著(zhù)到吸管或其他瓶、皿上,帶入培養液中會(huì )傷害細胞)。


浸泡75%酒精中的金屬器械用臺面消毒鑷子取出,經(jīng)無(wú)菌干紗布擦拭后,迅速通過(guò)火焰(器械不能在火焰中灼燒過(guò)長(cháng)時(shí)間),冷卻后使用,避免燙傷細胞。細胞培養液、牛血清、酶液的吸管,使用后不能再用火焰消毒,因為吸管中殘留的培養液被燒焦碳化,再使用時(shí),會(huì )把有害碳化物帶入培養液中毒害細胞。操作中手指被污染時(shí),可用酒精紗布或棉球擦拭。在實(shí)驗過(guò)程中,不要面向操作臺講話(huà)或咳嗽,避免將唾沫中微生物帶入超凈臺內,污染空氣。實(shí)驗者離開(kāi)超凈臺時(shí),立即用肘關(guān)節關(guān)閉側窗口,避免無(wú)菌室內細菌隨空氣流入凈化操作區。

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實(shí)驗后要求
實(shí)驗完畢,關(guān)閉超凈臺風(fēng)機和電源,未使用過(guò)的器材放入飯盒內,用過(guò)的玻璃器材投入清水中浸泡,包裝紙疊卷,繩成束分類(lèi)歸人,最后,超凈臺面用酒精紗布或棉球擦拭,紫外線(xiàn)消毒。
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注意事項

無(wú)菌操作離不開(kāi)火和酒精,操作中避免事故發(fā)生。要用打火機點(diǎn)火?;鸩顸c(diǎn)火時(shí),火星熄滅后投入廢缸內(缸內有廢酒精棉球)。酒精濺出臺面或瓶外壁時(shí),立即擦干;一旦發(fā)生著(zhù)火事故,立即關(guān)閉超凈臺風(fēng)機,用飯盒、濕布撲滅火焰。



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