根據不同細胞采取不同的培養細胞傳代方法。懸浮生長(cháng)的細胞可以用直接吹打或離心分離后傳代,或自然沉降法吸除上清后,再吹打傳代。貼壁生長(cháng)的細胞用消化法傳代,部分貼壁生長(cháng)的細胞用直接吹打即可傳代。 細胞傳代培養時(shí)常用的酶為胰蛋白酶,它可以破壞細胞與細胞、細胞與培養瓶之間的細胞連接或接觸,從而使它們之間的連接減弱或*消失。經(jīng)胰蛋白酶處理后的貼壁細胞在外力(如吹打)的作用下可以分散成單個(gè)細胞,再經(jīng)稀釋和接種后就可以為細胞生長(cháng)提供足夠的營(yíng)養和空間,達到細胞傳代培養的目的。
01
貼壁細胞的消化法傳代
①
吸除或倒掉瓶?jì)扰f培養液。
②
向瓶?jì)燃尤?-5ml PBS,輕輕搖動(dòng)培養瓶,使PBS流過(guò)所有細胞表面,然后吸掉或倒掉PBS后再加1~2 mL新的消化液進(jìn)行消化。
③
最好在37℃或25 ℃以上室溫環(huán)境下進(jìn)行消化。消化2~5 min后把培養瓶放置在顯微鏡下進(jìn)行觀(guān)察,發(fā)現細胞質(zhì)回縮、細胞間隙增大后,應立即終止消化。
④
加*培養基3-5ml,終止消化。
⑤
用彎頭吸管,吸取瓶?jì)扰囵B液,反復吹打瓶壁細胞,吹打過(guò)程要順序進(jìn)行,從培養瓶底部一邊開(kāi)始到另一邊結束,以確保所有底部都被吹到。吹打時(shí)動(dòng)作要輕柔不要用力過(guò)猛,同時(shí)盡可能不要出現泡沫,這些都會(huì )對細胞有損傷。細胞脫離瓶壁后形成細胞懸液。
⑥
計數,分別接種在新的培養瓶?jì)取?/span>
02
懸浮細胞的傳代
因懸浮生長(cháng)細胞不貼壁,故傳代時(shí)不必采用酶消化方法,而可直接傳代或離心收集細胞后傳代。直接傳代即讓?xiě)腋〖毎恋碓谄康缀?,將上清吸?/2~2/3,然后用吸管吹打形成細胞懸液后,再傳代。懸浮細胞常采用離心方法傳代,即將細胞連同培養液一并轉移到離心管內,800~1 000 r/min離心5 min,去除上清,加新的培養液到離心管內,用吸管吹打形成細胞懸液,然后傳代接種。
03
半懸浮細胞的傳代
半懸浮細胞部分呈現貼壁生長(cháng)現象,可不經(jīng)消化處理直接吹打使細胞從瓶壁上脫落下來(lái),而進(jìn)行傳代。但這種方法僅限于部分貼壁不牢的細胞,如SP2/0細胞等。直接吹打對細胞損傷較大,細胞也常有大量丟失,因而絕大部分貼壁生長(cháng)的細胞均需消化后,才能吹打傳代。
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