a549細胞凍存方式

　　a549細胞正常狀態(tài)下都呈長(cháng)梭形,從你提供的細胞圖片看,圓形細胞較多,可能是細胞生長(cháng)過(guò)密,相互擠壓所致!還有許多突起,估計是有其他細胞污染,或是培養液使用時(shí)間過(guò)長(cháng)，有污染所致，建議更換新鮮培養液，用新瓶傳代,密度不要過(guò)高!近來(lái)關(guān)于細胞過(guò)度傳代的問(wèn)題也引起了較為普遍的關(guān)注，由于過(guò)度傳代造成遺傳性狀的不穩定性和一些表型的喪失使得體外生物學(xué)效應的偏差也日益增大，因此盡量在購買(mǎi)或者引進(jìn)細胞株的時(shí)候盡量多多凍存低代次的細胞，以獲得接近原始建株細胞的生物學(xué)特性。

　　a549細胞凍存方式：

　　1．將細胞消化下來(lái)，移入離心管離心，棄上清；

　　2．準備凍存液比例：50%FBS+40%培養基+10%DMSO（現用現配）；

　　3.加1.5凍存液在離心管中，將細胞吹打均勻，移入凍存管內。

　　放入-20度冰箱2-4小時(shí)后．再放入-80度冰箱過(guò)夜，第二天放入液氮罐保存。

　　A549細胞人肺癌細胞系常見(jiàn)的污染如下：

　　1、細菌：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，根據感染細菌的不同，可有不同的外形，培養液一般會(huì )渾濁變黃，對細胞生長(cháng)影響明顯。

　　2、霉菌：培養液是清亮的，倒置顯微鏡下無(wú)雜質(zhì)，37度孵箱培養2-3天，仍清亮，但出現絮狀雜質(zhì)，鏡下可見(jiàn)呈細絲狀的團狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細胞仍可生長(cháng)，但時(shí)間長(cháng)之后，細胞的活力狀態(tài)變差，

　　用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內，再把水盤(pán)里也加上飽和量的硫酸銅?；蛘咴谂囵B箱的托盤(pán)加入飽和的消毒磷酸氫二鈉高鹽液體,可以防止霉菌污染。

　　3、支原體：黑色的，好象多為多形，培養液一般培養液一般會(huì )渾濁，原體感染，國內血清很多都沒(méi)有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中常見(jiàn)的微生物之一。而且它不能用過(guò)濾的辦法除去。支原體感染細胞以后，細胞病變不很明顯，只是慢慢死去。

　　4、黑蛟蟲(chóng)：可以穿透濾膜，也可以通過(guò)空氣傳播，低倍下為黑色點(diǎn)狀，高倍下可看見(jiàn)黑色的小蟲(chóng)游來(lái)游去，培養液也是不渾的，一般不會(huì )太影響，細胞還是可以用的。

　　5、真菌：一般培養液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些真菌開(kāi)始很像死細胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細胞碎片分不清，慢慢的會(huì )長(cháng)出很細的黑色絲狀物。真菌生長(cháng)的比較慢，不象細菌那么容易被發(fā)現，但是一旦發(fā)現有它的存在細胞就被污染了，也很難救活了。