原代細胞的培養方法

原代細胞接近和最能反映體內生長(cháng)特性，適宜用于藥物敏感性試驗、細胞分化等實(shí)驗研究。

　　原代細胞的培養，也叫初代培養，是從供體取得組織細胞在體外進(jìn)行的*培養，是建立細胞系的首步，是一項基本技術(shù)。
 

　　原代細胞的培養方法一般有以下4種：

　?、?組織塊培養法

　　組織塊培養是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著(zhù)于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長(cháng)。

　?、?消化培養法

　?、?懸浮細胞培養法

　　對于懸浮生長(cháng)的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無(wú)需消化，可采用低速離心分離，直接培養，或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養。

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　　器官培養是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養，器官培養可保持器官組織的相對完整性，可用于重點(diǎn)觀(guān)察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調節作用。
 

　　原代細胞的培養條件：

　　一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養)培養

　　1、細胞要通過(guò)充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性；

　　2、細胞接種時(shí)濃度要稍大一些，至少為5×108細胞/L；

　　3、培養基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養；

　　4、 胎牛血清濃度為10%-80%；

　　5、應在37℃5% CO2的培養箱中培養；

　　6、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落，漂??；

　　7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀，應將原代細胞換液；

　　8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養1周時(shí)，應將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
 

　　二、懸浮細胞培養

　　1、原代培養時(shí)要盡量去除紅細胞；

　　2、短期培養，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養基中進(jìn)行；

　　3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內，進(jìn)行分瓶試驗；

　　4、長(cháng)期培養時(shí)，淋巴細胞中要加入生長(cháng)因子，白血病細胞中要加入少量的原患者血清，以利細胞生長(cháng)；

　　5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次；

　　6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行。